低蛋白饲料在氨基酸平衡模式下对鲤鱼幼鱼生长、体成分和血清氨基酸的影响开题报告

1.国内外研究的动态

蛋氨酸（DL-Methionine，DL-Met）又名甲硫氨酸，学名2-氨基-4-甲硫基丁酸，分子式为CH3SCH2CH2CH（NH2）COOH，是唯一含硫必需氨基酸。蛋氨酸是水产动物所需的10种必需氨基酸之一，也是稚鱼发育阶段的第一或第二限制性氨基酸^[1-4]。自然界中的蛋氨酸有两种不同的构型，D型蛋氨酸和 L型蛋氨酸，工业合成的氨基酸多是 L 构型和 D 构型各 50%的混合物，即 DL-蛋氨酸（DL-Met）。蛋氨酸在动物体内的新陈代谢中有重要的生理功能：①蛋氨酸参与合成蛋白质，并且是真核生物蛋白质合成过程中与 mRNA 结合的第一个氨基酸；②蛋氨酸为甲基化反应提供甲基，在三磷酸腺苷转移酶的作用下生成性质活泼的腺苷蛋氨酸，除此之外它也为肾上腺素、肌酸和胆碱等营养素的合成提供甲基；③蛋氨酸参加体内代谢时产生大量的中间产物胱氨酸，对鱼类有保肝解毒的作用^[5]。目前，在水产饲料中添加蛋氨酸主要有3种形式，分别是晶体蛋氨酸、包膜蛋氨酸和蛋氨酸羟基类似物，本文的研究对象是晶体蛋氨酸。

2.研究目的及意义

鲤鱼是北方主要养殖鱼类之一, 其饲料不仅要注意蛋白质的含量,更要注重蛋白质的质量。优质的蛋白质中必需氨基酸种类齐全,含量比例合适,容易被鱼类所吸收。目前国内北方鲤鱼的配合饲料中采用的主要原料为豆粕,菜粕,而豆粕、菜粕类的限制性氨基酸为蛋氨酸。蛋氨酸缺乏会导致生长缓慢，饵料系数高,其主要原因是蛋氨酸不足引起氨基酸不平衡,饵料利用率下降,造成饲料浪费。因此，养殖饲料中蛋氨酸的含量多少直接影响着鱼类的生长发育和经济效益。所以，在用植物蛋白替代鱼粉时，在饲料中需要适量补充蛋氨酸可以改善饲料氨基酸组成^[2]

蛋氨酸是鲤鱼的必需氨基酸，能提高鲤鱼的生长，促进其采食，并增加粗蛋白、

粗脂肪和粗灰分在鲤鱼体内的沉积^[3]。研究发现，蛋氨酸可以提高动物对蛋白质的消化吸收利用。谢实勇等^[4]发现包被蛋氨酸可以提高内蒙古白绒山羊氮吸收能力。

姜淑贞等^[5]研究进一步发现蛋氨酸提高动物的蛋白质吸收能力，主要是提高对必需氨基酸的吸收能力。消化道的正常发育对动物的消化能力有重要的影响。饲料中的蛋白、脂肪等多种营养物质都会影响消化道的发育及功能，动物的消化力与消化道中的消化酶活性密切相关，饲粮组成在很大程度上影响消化酶的活性。

Met是一种毒性很强的氨基酸，高剂量Met引发的畜禽动物中毒已经被大量报道。高剂量Met饲喂野生小鼠，小鼠血清和肝脏脂肪过氧化水平显著升高，肝细胞出现气球样现象^[6]。但是关于对水产动物的作用还报道较少，且目前尚无定论。仅仅有研究表明，蛋氨酸的添加量大大超过鱼类的需求量，会导致鱼类生长下降和饲料利用率降低等现象。这可能是过量的单一氨基酸导致氨基酸不平衡而影响其他氨基酸吸收利用或者过量蛋氨酸的毒性作用所致。

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4.研究内容

4.1低蛋白情况下补足对鱼类生长性能的影响

投喂养殖实验结束后，对不同实验组进行采样，测得各组生长等指标，确定蛋氨酸对鲤鱼生长的影响，从而在保证鲤鱼健康生长的前提下，寻求提高鲤鱼饲料利用率的最适蛋氨酸水平。

4.2低蛋白情况下补足对全鱼体成分的影响

投喂养殖实验结束后，对不同实验组采集粪便，每组采集15天共计10g。对粪便的含量进行分析，探寻不同程度的蛋氨酸对鲤鱼消化率的影响。

4.3低蛋白情况下补足对对鲤鱼血清生化的影响

投喂养殖实验结束后，对不同实验组采集血液，蛋白质等，对其含量进行分析，得出数据进行统计整理

4.4 蛋氨酸含量对鲤鱼血细胞的影响

投喂养殖实验结束后，对不同实验组采集全血，用于测定WBC、RBC、HCT、HGB等血细胞指标

5.研究方法

通过在饲料中添加不同水平的晶体蛋氨酸来确定蛋氨酸对鲤鱼幼体生长、体成分和血清生化指标的影响，确定鲤鱼的蛋氨酸最适需求量。

6.实验方案

6.1 试验日粮

在等氮等能的前提下， 在不同蛋白水平下补足晶体蛋氨酸

6.2试验管理

实验开始前，将鲤鱼幼鱼体在大桶中暂养驯化15天，然后将相同规格健康的鱼随机分到网箱中，每个网箱30条，分为5个实验组，每个实验组三个平行。正式试验期间投喂含不同水平蛋氨酸配合饲料，以鱼体重的4%~6%进行表观饱食投喂（每隔2周对鱼体进行一次称重，以便调整饲料投喂量），每天投喂3次(8:00，11:00, 17:00)，每次分2-3遍投喂并注意观察吃食情况，投饵过程中尽量保持安静，防止额外应激。每日观察鱼摄食及死亡情况, 发现死鱼及时捞出称重记数,并检查死亡原因。试验期间水温25~26℃，pH为7.2-7.8，溶氧和氨氮分别大于5mg/L和小于0.01mg/L。正式试验饲养十周后，称量每个桶的总重，计算增重率、存活率、特定生长率和饵料系数等指标。在每个养殖桶中随机抽取4条鲤鱼，采血，量取体长、体重以及肝脏重以计算肝体比、肥满度等指标。用注射器从尾静脉采血。血样以4℃ 10000r /min 离心5min 制备血清，-80℃冻存备用。鱼体采血后立即剖开腹腔，剥离出内脏和肝胰脏并称重，取适量肝脏，肠道和食糜用于常规分析，以-20℃保存。

6.3 测定指标与方法

6.3.1 生长与形体指标

分别按下式计算增重率(weight gain rate，WGR) 、特定生长率(specific growth rate，SGR) 、饵料系数(Feed conversion ratios，FCR) 、摄食率( ingestion rate，IR)、蛋白质效率(Protein efficiency ratio PER)、肝体比(hepatosomatic

index，HSI) 、内脏比(viscerosomatic index，VSI)、肥满度(conditionfactor，CF) :

增重率( WGR，%) = 100 ( Wt－W0) /W0

特定生长率( SGR，% /d) = 100 ( Ln Wt－Ln W0) /t

饵料系数( FCR) = FI /( Wt－ W0)

摄食率(IR)=100 FI /t/( Wt W0)/2

肝体比( HSI，%) = 100 Wh /Wb

内脏比( VSI，%) = 100 Wv /Wb

肥满度( CF，%) = 100 Wb /L3

式中，W0( g)为鱼初体均重；Wt( g)为鱼末体均重；t(d)为饲喂天数；FI(g)每尾鱼平均摄食饲料总量(干重)；Wh(g)为每尾鱼末肝脏重；Wv(g)为每尾鱼末内脏重；Wb(g)为每尾鱼末体重；L(cm)为每尾鱼末体长。

6.3.2 体成分测定

粗蛋白质含量采用凯氏定氮法，粗脂肪含量采用索氏抽提法，粗灰分含量采用550℃灼烧法，水分含量采用105℃烘箱干燥法进行测定。

6.3.3 血清生化指标

血细胞各项参数（WBC、RBC、HGB、HCT等）在全自动血液细胞分析仪测定，血清参数（ALT、AST、UREA等在血清生化分析仪测定。

6.4 数据统计与分析

试验数据用SPSS 16.0统计软件包中的单因素方差分析(One-way ANOVA)，进行多重比较（Duncans procedure），P0.05表示差异显著，所有的结果均以平均值标准误(mean SE)表示。通过折线法(Broken-line)，根据鲤鱼的特定生长率和蛋白沉积率与饲料中赖氨酸蛋氨酸含量的相关性得出其最适蛋氨酸需要量。