环状circINHBB-614在猪卵泡闭锁过程中表达特征分析开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

1. 课题的意义

   卵泡闭锁是指卵泡退化从卵巢消失的现象，其包括颗粒细胞和卵母细胞的一系列形态学变化。卵泡闭锁是一个广泛发生的生殖生理现象, 是绝大部分卵泡命运的终点;在哺乳动物和人类,70%-99%卵泡在发育的不同阶段发生闭锁^[1]。卵泡闭锁是调整卵泡细胞和卵母细胞维持最佳比例的重要机制^[2]。尽管关于卵泡闭锁的研究工作有很多，但目前为止，调控卵泡闭锁的相关分子机制还未阐明，仍然还需要进一步的研究和探索。

   本课题拟从猪卵巢中完整分离健康、早期闭锁的3-5mm有腔卵泡，通过rt-qpcr检测circinhbb-614在卵泡闭锁过程中的表达模式和特征，探索其在猪卵泡闭锁过程中的作用。卵泡发育与闭锁是动物繁殖的生理基础, 环状rna对卵泡发育与闭锁的影响受到了研究人员的重点关注。同时通过荧光原位杂交（fish）观察circinha-315在猪卵巢颗粒细胞中的分布情况，进一步探索其在猪卵泡闭锁过程中的表达特点。环状rna调控细胞增殖能力，因而环状rna诱导卵泡闭锁可能是其影响卵泡发育的重要途径之一。阐明这一生理过程的分子机理对提高畜禽经济性状、治疗人类生育疾病、促进胚胎工程的发展有重要的意义^[3]。

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   2. 研究的基本内容和问题

   4.研究方案

   4.1研究目标

   本课题拟从猪卵巢中完整分离健康、早期闭锁的3-5mm有腔卵泡，通过rt-qpcr检测circinhbb在卵泡闭锁过程中的表达模式和特征，探索其在猪卵泡闭锁过程中的作用。

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   3. 研究的方法与方案

   5.1研究方法：

   首先通过文献研究法，查阅文献来获得资料，了解所研究的相关问题，确定研究课题，完善实验步骤:从卵巢中完整分离健康、早期闭锁的三级卵泡，用rt-qpcr检测卵泡膜和颗粒细胞中circinhbb的表达量，分析其表达模式和特征，并用原位杂交方法验证并分析circinhbb的表达及细胞定位，探索其在猪卵泡闭锁过程中的作用。

   5.2技术路线

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   4. 研究创新点

   特色或创新之处

   在雌性动物生殖过程中，表观遗传学调控因子circrna对基因的转录调控发挥着重要作用，这引起了学界广泛关注并取得了一定的研究进展。circinhbb为抑制素（inhibin，inh）家族基因inha作为宿主基因而产生的circrna分子。抑制素属于转化生长因子β(transforminggrowthfactor-β,tgf-β)超家族成员，该家族成员主要参与调节体内各种细胞生长和分化过程，其在卵泡闭锁过程中的表达情况及调控机制研究具有较强应用前景。

   虽然卵泡闭锁研究已经在进行了，但是以抑制素（inhibin，inh）家族基因inhbb作为宿主基因而产生的circrna分子对于卵泡闭锁的影响才是本实验的创新之处。

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   5. 研究计划与进展

   研究计划及预期进展

   2019.11-2019.12 试验准备；

   2020.01-2020.02 卵泡的剥离、rna提取、反转录获得cdna

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