不同品种的鸡在胚胎期肌肉发育差异的研究开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

（一）本研究的意义

随着生活水平的提高，生长快、肉质差的肉鸡品种已经不再受消费者欢迎，市场份额逐年缩小，而肌肉品质优异的肉鸡品种越来越受到消费者青睐^【1】。我国的地方优良鸡种具有肉质细嫩、口感好、鲜香味足的特点^【2】。因此，充分开展鸡肉品质的相关研究，掌握地方优良鸡种的肉质特点，对于地方鸡种的开发利用和优质肉鸡的生产都至关重要。本研究选取2个肉鸡品种，进行肉质物理及化学指标的分析，了解不同肉鸡品种之间肉质性状的差异，以期能为地方鸡种保护、选育提高以及杂交利用提供技术支撑^【3】。

为了追求鸡的生长速度，实现经济效益最大化，导致鸡肉品质下降，严重影响了养鸡的持续健康发展。造成这一现象的根本原因在于对鸡的生长速度等性状进行选育的同时，忽视了对肉质不利的基因，这一问题已引起全世界育种学家的高度重视，并纷纷转向对肉质的研究。影响肉品质的因素有很多，畜禽的品种、年龄、饲料这些因素都可以改变肌肉组织纤维、胶原质、液体、酶的生物学特性，其中肌肉纤维的生长发育规律及其过程中相关候选基因的调控具有关键性作用。

2. 研究的基本内容和问题

1.1项目研究目标：

1) 本试验以台湾红标土鸡和白羽鸡为素材，研究不同品种鸡（商品速成鸡、地方优质鸡种）肌肉组织的生长发育规律及相关组织学特性。

2) 采用萤光定量pcr技术检测了pax-3， pax-7基因以及myf5,myod,myog这些生肌因子在不同鸡品种胸肌中的表达规律，旨在为优质鸡专门化品系和配套系的选育提供技术支撑。

3. 研究的方法与方案

（1） 总RNA提取：

I. 去不同时期肌肉组织样品，液氮研磨后加1 ml Trizol到细胞（210⁶ PGC）中，反复轻轻吹打，室温静置5分钟后，转入1.5 ml EP管；

II. 每EP管加入200 μl氯仿，在漩涡器上剧烈振荡15-30秒，充分混匀。

III.在4℃下，12,000 rpm离心15分钟，离心后管内分三相：下层红色的酚相，中间层为氯仿相，上层为无色的水相；

IV. RNA沉淀：小心吸取400 μl上层水相至DEPC处理过的EP管中，加入等体积的异丙醇，室温放置15分钟，4℃，以12,000 rpm离心10分钟；

V. 弃去上清，用1.5 ml 75%的乙醇清洗沉淀，剧烈震荡，于4℃以7,500 rpm离心10分钟，用微量移液器尽可能将乙醇吸尽，于超净台内放置风干（15分钟左右，切记不可让RNA沉淀过度风干）；

VI. 总RNA浓度的测定：用紫外分光光度计（Nanodrop）检测OD260及OD280的值，计算RNA的浓度及OD260/OD280的比值。OD260/OD280（A260/280）可以反映RNA的纯度，1.8～2.1为纯度良好。总RNA浓度（mg/ml）= OD260 40 稀释倍数。

VII.总RNA完整性检测：取2 μl总RNA提取液，用1.5% 琼脂糖凝胶进行电泳（电泳槽，制胶板应先经甲醛处理），观察RNA提取情况，判断RNA的完整性。完整的真核细胞总RNA可见到28 S、18 S两条带。

（2） cDNA的合成：

I. 取一灭菌的无RNA酶的EP管，加入1 μg RNA模板和1 μl Oligo (dT) 引物，再加入适量 DEPC水至12 μl；

II. 稍离心，70℃水浴5 min，迅速置于冰上冷却至室温；

III.依次加入1 μl的RNA酶抑制剂、4 μl的5Reaction buffer、2 μl的dNTP，稍离心沉淀液体，37℃水浴5 min；

IV. 加入M-MLV反转录酶（200 U/ml）1 μl，稍离心；

V. 42℃水浴60 min， 70℃水浴5 min终止反应；冰上迅速冷却，所得引物即为cDNA。

（3） 用Primer 5.0软件设计引物，送至上海生工生物工程技术服务有限公司合成，引物序列及产物长度等如表2-1所示。引物用灭菌的ddH₂O稀释至100 μM浓度，于-20℃储存；使用浓度为10 μM，4℃放置。

（4） PCR的扩增，反应体系为20 μl

1) 反应条件：

4. 研究创新点

1） 阐明骨骼肌生长发育规律及不同品种鸡肌纤维发育的差异

2）本项目选择地方优质鸡与快大型肉鸡作为研究对象，可以从比较生物学的角度深入探讨肌肉发育调控机制与进化。这将为我国优良种质资源的保护和开发以及肉产品品质的提高提供的理论依据。

5. 研究计划与进展

2015年5月2015年6月：阅读相关资料（文献和书籍）

2015年6月2016年3月：购买试验与耗材，进行样品分析和试验分析

2016年3月：申报课题，提交开题报告