大豆蛋白水解物刺激CCK分泌对小鼠采食的调节开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

1、项目的研究意义：

本实验探讨CaSR在大豆蛋白水解物对小鼠采食及CCK分泌影响的介导作用，为探讨大豆蛋白水解物抑制小鼠采食的机制提供初步依据，也为进一步研究大豆蛋白水解物、营养感应受体与胃肠激素分泌的关系提供理论基础 。

2、现状分析： 大豆多肽即“肽基大豆蛋白水解物”的简称，是大豆蛋白质经蛋白酶作用，再经特殊处理而得到的蛋白质水解产物。大豆多肽是平均肽链长度为2~10的低分子肽混合物（以2~3的短肽为主），还含有少量的游离氨基酸、糖类、无机盐等成分^[1]。大豆多肽必需氨基酸组成与大豆蛋白质完全一样，含量丰富且平衡^[2]，还具有大豆蛋白质所不具备的良好的溶解性、吸水性等物理性质，而且具有促进矿物质吸收、促进脂肪代谢、降低胆固醇、降低血压、增强肌肉能力等多种生理功能^[3]。大豆多肽是食品、药品等行业中极具潜力的一种功能性基料，具有广阔的市场应用前景。 肠道内分泌系统由多种胃肠道内分泌细胞（enteroendocrine cells，EECs）组成，包括L细胞、K细胞、I细胞和肠嗜铬细胞等。其中，位于内分泌细胞上的各种营养感应受体能够特异性识别肠腔营养物质，并介导分泌包括胆囊收缩素（Cholecystokinin CCK）、胰高血糖素样肽-1（Glucagonlike peptide 1 GLP-1）、葡萄糖促胰岛素肽(Glucoindulinotropic peptide, GIP)以及酪酪肽（Peptide tyrosine tyrosine PYY）等20 多种胃肠激素 ^[4]。 其中胆囊收缩素(CCK)是第一个发现的具有饱腹感的激素,它是由位于十二指肠、空肠、肠神经系统和中枢系统中的I细胞分泌的一种由33个氨基酸残基组成的多肽。CCK通过与外周组织如胃、肠、胆囊、胰腺和中枢神经中的CCK-1受体 及存在于大脑的CCK-2R结合发挥其生理作用。肠腔内的营养物质,尤其是蛋白和脂质及其降解产物可以诱导CCK分泌,进而刺激胆囊和胰腺释放蛋白水解酶和脂解酶调控胃排空速率,使食物更好的消化^[5-6] CaSR是G蛋白偶联受体C家族中的一种,能够感应最初于牛甲状腺中克隆得到，能够通过感应胞外Ca2 浓度进而调节甲状腺激素分泌。CasR由3部分构成,分别为胞外结构域、胞内结构域及跨膜结构域^[7]。胞外结构域主要为半胱氨酸富集区,此外,捕虫夹结构域也存在于此,它可以与细胞外的营养物质,尤其是蛋白降解产物、肽类、多胺等结合,将信号传递至胞内环。跨膜结构域含有3个细胞内环和7个跨膜螺旋,负责传递胞外结构域信号至G蛋白。胞内结构域由3个胞内环及1个C00H组成,包含蛋白激酶C和蛋白激酶A的磷酸化位点,蛋白激酶磷酸化后可以传递CaSR信息至下游信号通路。CaSR既能感应胞外Ca2 浓度，也能感应L-氨基酸，在胃G细胞、D细胞^[8-9]以及十二指肠I细胞中高表达^[10]。研究表明，人和啮齿动物胃G细胞上的CaSR可感应 阳离子多肽及氨基酸，介导胃泌素的释放^[11]；胃壁细胞的CaSR通过感应氨基酸等营养素调控H -K -ATP酶的活性^[12]。猪上的研究发现，日粮蛋白水平影响胃和小肠CaSR的基因表达，并伴随胃蛋白酶活性、血清胃肠激素浓度的显著变化^[13-14]。此外，CaSR能感应芳香族L-苯丙氨酸和L-色氨酸促进猪胃肠激素的分泌，包括胃泌素、生长抑素、CCK等^[15-17]；L-精氨酸也可激活CaSR，通过下游信号分子腺苷酸环化酶（adenylate cyclase，AC）及磷脂酶C（phospholipase C，PLC）的活化，促进十二指肠CCK、GIP分泌^[18]。3、应用前景： 为研究营养感应受体对猪采食的调控作用提供参考依据。

2. 研究的基本内容和问题

1、研究目标： 本实验通过小鼠灌喂实验，探讨大豆蛋白水解物对小鼠采食、cck分泌的影响，并通过添加casr抑制剂、十二指肠casr基因表达变化，探究casr是否参与介导该过程。

2、研究内容：（1）探究不同浓度大豆蛋白水解物对小鼠采食的影响；（2）添加casr抑制剂，探究casr是否参与介导大豆蛋白水解物抑制小鼠采食和cck的分泌；（3）探究大豆蛋白水解物对十二指肠营养感应受体casr、pept1和gpr93基因表达的影响。

3、拟解决的关键问题： 阐明大豆蛋白水解物对小鼠采食及cck分泌的影响，探究casr是否参与介导该过程。

3. 研究的方法与方案