大米蛋白完全替代鱼粉对团头鲂生长、体组成和肉品质的影响开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

1. 国内外研究动态

团头鲂(megalobramaamblycephala)，原产湖北省武昌县，俗称武昌鱼、鳊鱼，隶属鲤形目，鲤科，鳊亚科，鲂属。我国的鳊鱼类分为2个属，即鲂属和鳊属，3个种，即长春鳊、三角鲂和团头鲂。团头鲂是我国重要的草食性经济鱼类之一，由于其食性广、成本低、生长快、成活率高、易捕捞，能在池塘中产卵繁殖，且具有味美、头小、含肉率高、体形好、规格适中等优点，因而被作为优良的草食性鱼类品种在全国普遍推广。近20年来，江苏、浙江、上海、安徽、山东、河南、河北、湖南、江西等20余个省、市、自治区引进养殖了团头鲂。目前，团头鲂在南方地区产量约占总产量10%以上，成为我国池塘、网箱养殖的主要品种，经济效益非常显著。

鱼粉，是优质的蛋白词料。其中蛋白质的含量高，各类营养成分配比均衡，并含有鱼体生长所需要的各类矿物质和微量元素，适口性好，易于消化吸收，被广泛应用于水产养殖业，带来了良好的经济效益和社会效益。随着水产养殖业不断发展,养殖规模的不断扩大，以鱼粉为代表的动物性蛋白原料早己日益匮乏，优质的蛋白饲料原料供应却面临严重不足,目前主要的蛋白饲料原料全部依靠进口,已远远无法满足市场需要，且价格昂贵。如何最大程度降低鱼粉在水生动物配合饲料中的水平，已成为水产饲料行业的关注热点。目前，降低鱼粉使用的方式主要有以下几种：（1）通过在饲料添加节约蛋白质的脂肪或糖类，部分替代用于能源的蛋白质，从而提高水生动物对蛋白质的利用率，起到节约蛋白质的作用。（2）开发新型饲料蛋白源，用于替代鱼粉：动物蛋白源、植物蛋白源和混合蛋白源。（3）提高鱼粉等蛋白源的利用效率，主要通过改善加工工艺和添加氨基酸、酶制剂等添加剂方式来实现。

2. 研究的基本内容和问题

目标：了解大米蛋白完全替代鱼粉对团头鲂生长、体组成和肉品质的影响。

内容：研究大米蛋白源完全替代鱼粉后，对团头鲂生长、体组成和肉品质的影响。

拟解决的关键问题：

3. 研究的方法与方案

1 试验材料和方法

1.1试验鱼种及分组

本研究在南京农业大学浦口实验基地进行，实验开始前将团头鲂幼鱼暂养于大塘网箱内，期间用商品饲料进行驯化。1周后，挑选活力稳定、规格整齐，初均重为( 1070.5)g的团头鲂幼鱼300尾，随机分成5组，每组4个重复，每个重复15尾。实验在规格为1m1m1m的网箱中进行。

2. 试验日粮

试验所用日粮为生产日粮，对照组以鱼粉、豆粕、菜粕、棉粕作为蛋白源，鱼油和豆油作为脂肪源，麸皮和面粉作为糖源，其他实验组分别以大米蛋白、大米蛋白添加硬脂酸包被的微囊赖氨酸、大米蛋白添加晶体赖氨酸替代鱼粉，具体饲料配方见表1。各种原料分别粉碎过60目筛，先把磷酸二氢钙、复合预混料、食盐混匀均匀，再加大料逐级充分混匀，后加适量水，用制粒机制成粒2.0 mm的颗粒饲料，在避光条件下晾干备用。

表1 实验饲料组成成分及营养水平

^a 每千克预混料中含有Premix supplied the following minerals(g kg^-1 of diet) and vitamins (IU or mg kg^-1 of diet):CuSO₄5H₂O, 2.0g; FeSO₄7H₂O, 25g;ZnSO₄7H₂O, 22g; MnSO₄4H₂O, 7g; Na₂SeO₃,0.04g; KI, 0.026g; CoCl₂6H₂O, 0.1g; Vitamin A, 900000IU;Vitamin D, 200000IU; Vitamin E, 4500mg; Vitamin K₃ ,220mg; Vitamin B₁, 320mg; Vitamin B₂, 1090mg;Niacin, 2800mg; Vitamin B₅, 2000mg; Vitamin B₆, 500mg;Vitamin B₁₂, 1.6mg; Vitamin C, 5000mg; 泛酸Pantothenate, 1000mg; 叶酸Folic acid, 165mg; 胆碱Choline, 60000 mg.

^b Carbohydrate (nitrogen-freeextract) = 100 moisture crude protein crude lipid crude fiber ash.

3日常管理

在实验前，进行适应性驯养7d，正试期60d。团头鲂实验开始后每天7:30、12:30、17:30分3次投喂。投喂时记录投喂量，观察并记录摄食情况，并且每天9:00和13:00各测1次水温。定期测定网箱内水温、溶解氧及pH值。保持池塘内微流水，并定期清洁网箱以确保网箱内外水质良好。养殖期间，水温272℃，溶解氧大于3.8mg/L，pH7.2-7.5。

4样品采集

正式饲养8周后，禁食24h，进行采样。首先，将每个网箱内所有鱼打捞上来，称总重，并每个网箱中选取4尾鱼，量完体长和称完每尾鱼体重后，用注射器于尾静脉采血。采集的血液置于预先制好的肝素抗凝管中，于4℃下3500-4000r/min离心10min，收集血清，标好后分装于-20℃保存备用。将采血后的鱼首先剖开腹腔，取出整个内脏团称重，然后，逐步分离肝脏、肠道组织，肝脏需要进行称重。各组织需采取不同的保存方式，其中肝脏保存方式包括部分置于离心管中，保存于-20℃下，用于生化指标的测定；部分置于冻存管当中，而后置于液氮罐当中，采样结束后，置于-80℃超低温冰箱当中保存；部分置于甲醛和戊二醛固定液当中，用于进行光镜和电镜观察。肠道组织保存方式与肝脏相同。最后，采取侧线以上背鳍以下的背肌部分，进行肉色的测定，以及留取部分进行质构和系水力的测定，其次留取部分置于自封袋当中，以及留部分于冻存管当中，有待分子指标的测定。

5 测定指标与方法

5.1生产性能

计算各试验组的增重率（WGR）、存活率、特定生长率（SGR）、饵料系数（FCR）、肥满度（CF）、脏体比（VSI）、肝体指数（HSI）、胴体比（DP）、蛋白质效率比（PER）、蛋白质保留率。

增重率 (Weight gainX, WG, %) = 100 (Wt - W₀)/ W₀

特定生长率 (Specific growth rate, SGR, % /d) = 100 [ln(Wt) - ln(W₀)] /T

饵料系数 (Feed conversion ratio, FCR) = F / (Wt - W₀)

蛋白效率比 (Protein efficiency ratio, PER) = (Wt - W₀)/ (F CP)

胴体率 (Dressout percentage, DP, %) = 100 空壳重 (g) / 体重 (g)

肥满度 (Condition factor, CF, %) = 100 体重 (g) / 鱼体全长 (cm)³

肝体比 (Hepatosomatic index, HSI, %) = 100 肝脏重 (g) / 体重 (g)

氮保留率 (Nitrogen retention efficiency, NRE, %) = 100 (Wt CP_t W₀ CP₀) / (F CP)

式中W₀为鱼体初重(g)；Wt为鱼体末重(g)；F为投饲量(g)；CP₀为试验开始时鱼体粗蛋白含量(%)，CPt为实验结束时鱼体粗蛋白含量(%)，CP为饲料中粗蛋白含量(%)，T为饲养天数(d)。

5.2 体组成及肌肉组成

测定全鱼、胴体、肌肉和肝胰脏中的水分、粗蛋白（CP）、 粗脂肪（EE） 、粗灰分（Ash）的含量。以上参数的测定参照AOAC（1984）的方法：用105℃烘干至恒重测定样品水分；用FOSS凯氏定氮仪测定粗蛋白含量；用索氏抽提系统通过乙醚抽提失重法测定样品粗脂肪含量；用马福炉550℃高温灼烧法测定灰分含量。

5.3. 肌肉品质指标的测定

（1）肌肉系水力

肌肉滴水损失的测定：取同侧新鲜背肌用吸水纸吸干背肌上的水分和血渍，称重，放于离心管中(离心管底部垫有适量吸水纸)，于4℃4000r/min离心20 min，取出肉样，用吸水纸吸干肌肉表面的水分，称重。DL = 100(W₀－W_t)/W₀

肌肉蒸煮损失测定: 取同侧新鲜背肌用吸水纸吸干背肌上的水分和血渍，称重，装入密封袋中，于70℃下隔水蒸煮15min，取出肉样冷却，用吸水纸吸干肌肉表面的水分，称重。CL = 100(W₀－W_t)/W₀

（2）肌肉肉色

采用CR-10美能达电脑色差计进行测定。

（3）个体含肉率

活体样本运回实验室后，取4尾用纱布擦干鱼体表，依次编号、称量质量、测量体长，按常规方法解剖分离鳃、鳞、鳍、皮肤、内脏等，称量质量，然后蒸煮使骨肉分离，挑出所有骨骼，自然干燥，称量质量。按下式计算含肉率：

含肉率/%=(鱼体纯肉质量/鱼体总质量)100%

（4）pH值

pH₂₄的测定方法：背最长肌完整剥离后，从背最长肌中段切口中插入pH计电极使电极深入眼肌1Cm以上，读取pH值，以每个样品重复3次读取的均值为准，度量前pH计须用pH=4.00和pH=6.86的标准缓冲液校正，宰后待测的背最长肌要迅速置于0℃-4℃冰箱保存。

（5）肌肉质构：

测定反映指标主要包括：硬度、弹性、咀嚼力、回复力和凝聚性。 采用QTS-25物性测试仪( CNSFarnell公司，英国) 进行测定。在TPA(质构剖面分析)模式下，取1 cm³背部肌肉，采用SMS P /25圆形探头，起点感应力5.0g，测试速度5.0mm/s，二次压缩间隔时间1s，每尾鱼取6个样品，每个样品测2次，取平均值。并采用质构测定配套软件Texture Pro v 2.0进行分析。

（6）肌肉氨基酸的测定

鱼体肌肉蛋白质氨基酸含量采用日本日立L-8800全自动氨基酸分析仪测定。称取鱼肌肉样0.04g(含氨基酸大约25mg )放入5mL水解管中，加6mol/LHCL5mL真空水解24h；取出，打开封口，定容到50mL，吸取样品10mL减压浓缩，到干为止，用10mL水溶解；用0.45μm膜过滤，吸取过膜滤液20μL，加缓冲液60μL，加20μL衍生试剂。采用Waters2690高效液相色谱仪柱前衍生法测定。分析条件：summetry C18色谱柱；柱温45℃；泵压13179MPa左右；波长248nm；梯度洗脱，洗脱液流量1mL/min。

6. 数据统计及分析

试验数据采用平均值标准误表示，采用SPSS 16.0软件中的单因素方差分析方法（One-wayANOVA）对数据进行方差分析，并用Duncan氏法对数据进行显著性检验，差异显著性水平设为P0.05。

4. 研究创新点

1、首次研究大米蛋白在团头鲂日粮中完全替代鱼粉效果，

2、并且考察晶体氨基酸能否被团头鲂有效利用，且与微囊赖氨酸进行对比，研究两种剂型氨基酸效果。

5. 研究计划与进展

（1）2015年7月－2015年10月 准备实验相关材料，练习实验基本操作，调配饲料，挑选团头鲂幼鱼，分组进行养殖试验。

（2）2015年10月-2015年11月 每组挑选合适的样本，测定生长情况并采集数据，进行实验操作。

（3）2015年11月-2016年5月 数据分析及论文攥写。