环状circINHA-315在猪卵泡闭锁过程中的表达特征研究开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

本课题研究意义：

哺乳动物的卵巢是产生雌性配子(卵子)的场所，经历了卵泡的募集、选择、优势化和闭锁的一系列过程。卵泡闭锁是指卵泡发育到一定的阶段后停止发育并退化的现象,是一种正常的繁殖生理。雌性哺乳动物中，仅有极少数卵泡发育成熟并排卵，绝大部分卵泡(70%-99%)在发育过程中退化，最终被机体清除。闭锁，是绝大部分卵泡命运的终点^[1]。长期以来，人们对卵泡闭锁展开了大量研究工作，但迄今为止，调控卵泡闭锁确切的分子机制尚未阐明，仍然需要进一步的研究和探索。

本课题拟从猪卵巢中完整分离健康、早期闭锁的3-5mm有腔卵泡，通过qrt-pcr检测circinha-315在卵泡闭锁过程中的表达模式和特征，探索其在猪卵泡闭锁过程中的作用。同时通过荧光原位杂交（fish）观察circinha-315在猪卵巢颗粒细胞中的分布情况，进一步探索其在猪卵泡闭锁过程中的表达特点。阐明这一生理过程的分子机理对于丰富繁殖理论、提高动物繁殖力、促进胚胎工程发展、治疗人类生育类疾病具有十分重要的意义^[2]。

2. 研究的基本内容和问题

研究目标

本课题拟从猪卵巢中完整分离健康、早期闭锁的3-5mm有腔卵泡，通过rt-qpcr以及fish检测circinha-315在卵泡闭锁过程中的表达模式和特征，探索其在猪卵泡闭锁过程中的作用。

研究内容

3. 研究的方法与方案

研究方法：

首先通过文献研究法，查阅文献来获得资料，了解所研究的相关问题，确定研究课题，完善实验步骤:从卵巢中完整分离健康、早期闭锁的三级卵泡，用rt-qpcr检测闭锁卵泡中circinha-315的表达量，分析其表达模式和特征，并用原位杂交方法验证并分析circinha-315的表达及细胞定位，探索其在猪卵泡闭锁过程中的作用。

4. 研究创新点

特色或创新之处：

在雌性动物生殖过程中，表观遗传学调控因子circRNA对基因的转录调控发挥着重要作用，这引起了学界广泛关注并取得了一定的研究进展。circINHA-315为抑制素（Inhibin，INH）家族基因INHA-315作为宿主基因而产生的circRNA分子。抑制素属于转化生长因子β(transforminggrowthfactor-β,TGF-β)超家族成员，该家族成员主要参与调节体内各种细胞生长和分化过程，其在卵泡闭锁过程中的表达情况及调控机制研究具有较强应用前景。虽然卵泡闭锁研究已在进行，但是以抑制素（Inhibin，INH）家族基因INHA-315作为宿主基因而产生的circRNA分子对于卵泡闭锁的影响才是本实验的创新之处。

5. 研究计划与进展

研究计划及预期进展：

2019.11-2019.12 试验准备；