高温条件下芦丁对奶牛乳腺上皮细胞生长和增殖的影响开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

（一）研究意义

奶牛耐寒怕热，当温度超过25℃或者温室指数(thi)超过72时，奶牛就可能出现热应激。当奶牛受到热应激时，会出现采食量下降，新陈代谢紊乱，致使泌乳量减少和乳成分改变。奶牛的泌乳性能作为其重要的生产指标，受温度影响较为显著。高温环境会破坏奶牛乳腺上皮细胞的结构和代谢途径，引起细胞产生快速应激反应，当温度超过临界极限时，热刺激会导致细胞死亡[1]。芦丁又称芸香苷，是一种存在于植物体内的黄酮类化合物，其结构是由槲皮素c3位上的羟基和芸香糖结合而形成的双糖苷，这种结构与内源性雌激素17-β-雌二醇具有相似的双苯环结构，可以通过结合雌激素所占据的雌激素受体的相同位点，而发挥雌激素样作用[2]。芦丁有维生素p样，抗细菌，抗氧化、抗病毒和维持血管弹性等生理作用，近年来在药物和保健品行业应用广泛。目前有研究表明，黄酮类化合物能够显著提高奶牛乳腺上皮细胞抗热应激能力，对细胞的生长与增殖具有积极的调控作用[2]。芦丁具有雌激素样作用，能够促进乳腺发育和乳腺细胞增殖[5]。日粮中添加芦丁可以增强奶牛的泌乳性能，提高奶牛的消化与代谢能力[2]。虽然芦丁已被证明具有多种药理活性，但高温条件下芦丁对奶牛乳腺上皮细胞的作用尚未有文献报道。因此本试验通过设计不同浓度的芦丁体外培养奶牛乳腺上皮细胞，测定细胞成活力，毒性和形态变化等相关指标，分析评估高温条件下不同浓度芦丁对奶牛乳腺上皮细胞抗热应激的生物学效应，并发掘芦丁的生物学价值。

（二）国内外研究概况

2. 研究的基本内容和问题

（一）研究目标

研究高温条件下不同浓度的芦丁对奶牛乳腺上皮细胞的成活力、毒性和形态变化的影响，以探讨芦丁的添加价值，为深入探究芦丁缓解奶牛热应激提供理论依据，并为进一步开发利用芦丁的生物学价值打下科学基础。

3. 研究的方法与方案

（一）研究方法

1.培养奶牛乳腺上皮细胞并确定芦丁的添加剂量

采用组织块培养法培养获得奶牛乳腺上皮细胞，将纯化的细胞接在含有培养液的培养基中，37℃，5%co_2，培养箱内培养。试验分五组，分别为空白对照组、4‰二甲基亚砜（dmso）组，10μg/ml芦丁组、20μg/ml芦丁组和40μg/ml芦丁组。其中芦丁用dmso完全溶解，各处理组每5ml培养基中含有4‰ dmso与对应剂量芦丁。

4. 研究创新点

(1)首次研究并探讨高温条件下芦丁对奶牛乳腺上皮细胞生长和增殖的影响

(2)通过体外培养奶牛乳腺上皮细胞，控制其生长条件，避免试验环境的局限性

5. 研究计划与进展

2019.05-2019.07 查阅相关文献，确定选题，撰写文献综述；

2019.08-2020.03 丰富实验知识储备，撰写开题报告；