大豆LEC基因的分离及亚细胞定位开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

一、研究的意义植物凝集素是含至少一个非催化结构域并能可逆结合特异单糖成寡糖的一类(糖)蛋白质[1]，在动物、植物的体内广泛存在。

其最大的特点是能够识别糖蛋白和糖脂中，特别是细胞膜中的复杂的碳水化合物的结构中细胞膜表面的糖基。

因为凝集素具有只对某一种特异性糖基专一性结合的能力，所以凝集素可以作为研究细胞膜结构的探针。

2. 研究的基本内容和问题

研究目标本实验主要构建组织特异性表达载体,利用农杆菌介导法转化GmLEC 基因，获得能够稳定遗传、较高抗蚜虫、抗生物胁迫的大豆新种质,并分析GmLEC基因在大豆中的表达以及对生物胁迫的抗性效果。

研究内容及拟解决的关键问题（1）提取大豆品种RNA（2）翻转RNA为cDNA（3）完成DNA扩增及PCR引物设计（4）完成pBI121-GmLEC过表达载体的构建

3. 研究的方法与方案

研究方法及实验方案(1)植物重组表达质粒的构建从大豆品种中扩增出gmlec基因，利用基因两端携带的限制性酶切位点 ，将其克隆到植物表达载体pbi121中，构建pbi121-lec转基因表达载体，并转化到农杆菌eha105； (2)农杆菌介导的拟南芥的遗传转化与转基因植株的获得利用农杆菌介导法将重组质粒导入农杆菌进行拟南芥的遗传转化，并在含有50μg/ml kan ms培养基上筛选转基因拟南芥种子，得到转基因阳性植株。

(3)转基因拟南芥的验证进一步提取rna和dna，从分子水平进行验证。

可行性分析提rna及翻转cdna以及引物设计都是可操作性极高的基础实验pcr扩增以及胶回收有明确的操作步骤。

4. 研究创新点

运用的实验材料较有代表性并且被广泛应用，实验方法较为成熟，可操作性比较强，实验结果的实践指导意义比较大

5. 研究计划与进展

1.完成相关RNA的提取2.获得翻转的cDNA3.获得PCR扩增的引物完成pBI121-GmLEC过表达载体的构建