拟南芥AGO2与AMC1的互作对植物抗病性的影响开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

本课题的意义：

植物体mirna发生转录以后, 前体mirna将经过两步被dcl(dicer-like)加工成mirna：mirna﹡双链体。mirna：mirna﹡双链体中的2′-羟基或3′-羟基在hen1(huaenhancer 1)作用下发生甲基化。接着, mirna在hst和其他因子的帮助下被运送到细胞质中, 这时成熟的甲基化mirna与ago2(argonaute 2)等一起形成rna诱导沉默复合体(rna-induced silencing complex,risc), mirna﹡被降解, risc中的mirna能通过ago2起着切割互补的靶mrna、阻遏靶mrna的翻译等功能。可见，ago2 蛋白是risc中的主要组成成分。而amc1蛋白则已有报道称其与拟南芥的抗病性有着直接关系，因此，本实验旨在验证是否是risc的核心成员ago2通过与amc1互作，进而影响了植物的抗病进程。以期发现新的mirna 调控机制，为植物抗病性提供研究线索和理论基础。

国内外研究概况：

2. 研究的基本内容和问题

研究的目标：

本实验通过对ago2和amc1基因的研究，探究ago2蛋白与amc1蛋白在植物体内是否存在相互作用。

提取目的基因，连接表达载体，构建感受态细胞，导入受体植株诱导表达，提取蛋白验证互作。

3. 研究的方法与方案

研究方法、技术路线：

提取拟南芥rna反转录cdnapcr扩增ago2/amc1基因连接载体转化农杆菌菌落pcr验证侵染烟草提取蛋白免疫共沉淀

（详细技术路线请见上传附件）

4. 研究创新点

特色或创新之处：

AMC1已有报道其与植物抗病性相关，而AGO2又是RISC的重要组成部分。本试验通过研究AMC1和AGO2基因诱导产生的蛋白间是否存在互作，为以后探究miRNA 是否影响蛋白的表达，进而影响植物的抗病机制提供相关理论基础。

5. 研究计划与进展

研究计划及预期进展：

（1） 2013年8月7日2013年10月14日，成功克隆出拟南芥amc1与ago2基因。

（2） 2013年10月16日2013年10月17日，成功将ago2与amc1目的基因片段连接到p-easy blunt 载体。