RNA解旋酶DDX21在猪A群轮状病毒复制中的作用初探开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

意义及前景：

dead-box ( dead-box proteins / dead-box heli-cases) 家族蛋白是一类兼具有 atp 酶活性和 rna解旋酶活性的rna解旋酶，属于细胞rna 解旋酶超家族 2 型( sf2) 。dead-box 蛋白家族成员众多，在各种涉及 rna的细胞进程中均发挥重要作用，包括转录、mrna前体剪接、mrna输出、核糖体生成、翻译起始、细胞器基因表达、rna 降解等^[1-2]。多项研究表明 ddx21 不仅参与 rna的生成和加工过程^[3]，在不同类型肿瘤的发生发展以及机体的炎症反应和信号传递中 ddx21 也起到非常重要的作用^[4]，同时 ddx21 也参与了多种病毒( 包括 influenza a virusv( iav)、human immunodeficiency virus 1 ( hiv )和 dengue virus ( denv)等) 的增殖过程。

本实验通过小干扰rna抑制试验探究ddx21在猪a群轮状病毒复制中的作用，同时，通过ddx21的过表达验证其对猪a群轮状病毒复制的影响，为研究猪 ddx21 蛋白的结构和功能奠定基础。

2. 研究的基本内容和问题

研究目标：探究rna解旋酶ddx21在猪a群轮状病毒复制中的作用；

研究内容：小干扰rna抑制试验和ddx21的过表达试验；

拟解决的问题：293ft细胞不易培养，易从培养皿脱落，需严格把控细胞数和传代时间；摸索合适的转染和接毒、收毒时间；westernblot每个步骤的时间都对结果影响较大，多次重复，掌握准确的时间，减少误差。

3. 研究的方法与方案

研究方法：根据实验室已有的技术条件设计实验并进行研究，荧光定量pcr观察mrna表达量，westernblot试验观察蛋白表达情况。

实验方案：

1.小干扰rna抑制试验：体外转录合成小干扰rna（sirna）（公司合成），经脂质体转染ipec细胞，相对荧光定量pcr从核酸水平观察mrna表达量，westernblot观察sirna干扰后蛋白表达水平；接毒后，绝对荧光定量pcr检测小rna干扰抗病毒情况。

4. 研究创新点

1.小干扰RNA抑制试验探究对RV病毒复制的影响：通过相对荧光定量PCR进行差异表达分析，验证其干扰作用；绝对荧光定量PCR测定病毒拷贝数，观察其对病毒复制的影响；WB可观察蛋白表达情况。

2.DDX21过表达试验：WB观察接毒不同时间的蛋白表达情况。

5. 研究计划与进展

2018.09-2018.11 查阅相关文献资料，拟定课题、实验步骤及方法，收集实验材料，做好实验前期准备；2019.02-2019.04 完成实验内容，并记录相关数据；2019.05-2019.06 整理实验数据、分析实验结果、撰写论文、进行答辩。