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1. 研究目的与意义

本研究旨在利用外源表达在大肠杆菌中的D-nLDH突变体将苯丙酮酸立体选择性地还原成D-苯基乳酸。

为了提高D-苯基乳酸产量，优化该基因工程菌的最适产酶条件，利用全细胞催化体系探索生物催化法合成D-苯基乳酸的最佳合成条件，为其进一步深入研究和工业应用奠定基础。

2. 国内外研究现状分析

国内外研究表明d-苯基乳酸的化学合成主要有以下几种方法：吖内酯锌汞齐还原法;由ρ-苯基丙烯酸锌汞齐还原法；用苯甲醛经缩合、开环、水解、还原4步反应制得，合成路线中用clemensen还原法将а-酮酸还原为а-羟基酸。

但是基于化学合成法的诸多缺点，近几年来各国研究人员逐渐转向了生物合成法的开发与研究。

早在1986年，kamata等[9]就用乳糖发酵短杆菌(brevibacterium lactofermentum)发酵生产了r-3-苯基乳酸，产量为1.94g/l，并且申请了专利。

3. 研究的基本内容与计划

1.利用外源表达在大肠杆菌中的d-nldh突变体将苯丙酮酸立体选择性地还原成d-苯基乳酸2.优化该基因工程菌的最适产酶条件，利用全细胞催化体系探索生物催化法合成d-苯基乳酸的最佳合成条件1周，查阅文献资料，了解研究内容，对实验涉及仪器、操作方法有一定了解。

2周，掌握的基本实验技能，制定一套实验方案。

3-13周，按照研究内容逐步进行实验。

4. 研究创新点

目前国内外文献报道的pla的生产过程，所得pla均为d-型和l-型两种异构体的混合物，高光学纯pla单体在化工、医药和食品领域都具有重要的应用价值。

以ppa为底物通过立体选择性还原获得手性d-pla，原料来源丰富，操作简单。

基于上述考虑，本课题以手性d-pla的生物催化法生产为研究目标，以ppa为出发底物，建立生物催化法催化ppa生产d-pla的操作工艺，具有重要的应用价值。