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1. 研究目的与意义

1.研究的目的与意义光学纯的α-羟基羧酸是一类应用广泛的平台化合物，可以合成许多在c-2位有手性羟基基团的重要化合物。

利用野生型菌株很难获得单一构型的α-羟基羧酸。

近年来，国外开始研究使用大肠杆菌基因工程菌发酵生产光学纯的α-羟基羧酸。

2. 国内外研究现状分析

2.国内外同类研究概况2.1乳酸的研究现状2.1.1乳酸的性质与应用乳酸（iupac学名：2-羟基丙酸）是一种化合物，它在多种生物化学过程中起作用。

它是一种羧酸，分子式是c3h6o3。

它是一个含有羟基的羧酸，因此是一个α-羟酸（aha）。

3. 研究的基本内容与计划

3.内容与计划1. 重组质粒 blunt-ldha的的构建提取大肠杆菌w3110基因组，设计引物，pcr扩增d-乳酸脱氢酶基因，将pcr产物克隆到blunt克隆载体上，得到重组质粒b-ldha。

2. up-blunt-down片段的获得以b-ldha质粒为模板，设计引物进行pcr扩增，得到d-乳酸脱氢酶基因编码基因上下游的各400个左右碱基及其插入载体blunt，并进行纯化及dpn1处理。

3. 重组质粒b-a-cb的构建以pxz-cs质粒为模板，设计引物进行pcr扩增，得到含有氯霉素基因（cm）和果聚糖蔗糖转移酶基因（sacb）的dna片段。

4. 研究创新点

在本研究中，我们采用两步同源重组基因敲除技术构建了用于L-乳酸生产的大肠杆菌工程菌，其遗传稳定，L-乳酸合成途径中的L-乳酸脱氢酶编码基因整合在大肠杆菌的染色体中，不需要高拷贝质粒的参与，避免了质粒对细胞的代谢负荷。