全文总字数：1497字

1. 研究目的与意义

乳酸是世界上公认的三大有机酸之一，乳酸及其衍生物广泛的应用于食品、医药、饲料、化工等领域。由于乳酸的酸性柔和且稳定，而且有助于食品的风味，因此在食品工业上被广泛用作酸味剂、防腐剂和还原剂。此外还可以用于清凉饮料、糖果、酸奶、糕点的生产，也可用于鱼、肉、蔬菜的加工和保藏。保加利亚乳酸杆菌(lactobacillus bulgaricus)是德式乳杆菌的一个亚种，保加利亚乳杆菌繁衍至今已经遍布世界，其效能优异，助人健康长寿，作为发酵剂在食品工业中被广泛应用在酸奶的生产中，由于保加利亚乳杆菌具有调节胃肠道健康、促进消化吸收、增加免疫功能、抗癌抗肿瘤等重要的生理功能，因此被规定为可用于保健食品的益生菌菌种之一，在食品发酵、工业乳酸发酵、饲料行业和医疗保健领域均有比较广泛的应用。该菌是乳酸菌中产酸能力最强的菌种，最高产酸量为2 %，能利用葡萄糖、果糖、乳糖等进行同型乳酸发酵产生d型乳酸，发酵可产生香味物质。对热的耐受性差，生长适宜温度为44-45 ℃，在乳中，该菌显示温和的蛋白分解性和较弱地脂肪松懈性，对碳酸盐比较敏感，能产生称做保加利亚菌素（bul-garican)的抗生素。本实验将培养保加利亚乳酸杆菌生产乳酸进行biolog鉴定，同时还将研究不同碳源对乳酸产量的影响。

biolog微生物自动分析系统是美国biolog公司从1989年开始推出的一套微生物鉴定系统，可以鉴定包括细菌、酵母、丝状真菌在内的近2000种微生物。同时，biolog技术还可以进行碳源代谢分析，微生物在利用95种碳源过程中产生自由电子，与四唑盐染料发生还原显色反应，颜色的深浅反应微生物对碳源的利用程度。为了进一步研究实验室一株d-乳酸生产菌的属性以及对碳源的利用状况和产d-乳酸的关系，本实验利用biolog全自动微生物分析鉴定仪对该菌株进行数据分析鉴定。

2. 国内外研究现状分析

1：biolog鉴定技术概况

1.1 biolog鉴定的基本原理

biolog系统是一种测定微生物对不同单一碳源利用能力的快速、简便方法，最早应用于纯种微生物的鉴定。biolog平板上的96个微孔中含有各不相同的有机碳源，微生物代谢碳源过程产生电子传递，引起鉴定板微孔中四唑盐染料产生还原反应呈现紫色，颜色的深浅显示微生物对相应碳源利用能力的强弱，其利用情况形成了微生物的代谢特征指纹；代谢特征指纹是微生物菌种鉴定的依据，也可用于鉴别和区分不同来源的微生物群落，或者反映微生物群落的功能变化。鉴定板在相应的培养条件下培养4-6小时或16-24小时即可形成代谢模式。经相应的仪器记录，结果输入biolog配套软件、与标准菌种的数据库进行比较，从而将被测菌种鉴定出来。实验利用biolog全自动微生物分析鉴定仪对发酵菌进行数据分析鉴定，和传统鉴定方法相比，自动鉴定系统过程快捷，数据可靠，数据库包含菌种广泛。对更好的研究纯菌种不同碳源代谢活性，代谢功能有重要意义，选用的不同碳源从定量角度分析保加利亚乳酸杆菌利用不同底物的生产能力。

3. 研究的基本内容与计划

研究内容：

保加利亚乳酸杆菌无氧发酵d-乳酸的生产水平以及不同碳源（葡萄糖，果糖，乳糖等）对发酵的影响。

计划安排：

4. 研究创新点

保加利亚乳杆菌在食品发酵领域应用日趋广泛，并且乳酸菌的生理保健功能也日益被大家接受。随着科技的进步，在分子生物和基因工程领域，保加利业乳杆菌的应用还将更加广泛，前景更加关好。

与传统鉴定方法相比，Biolog自动微生物鉴定系统快速、便捷、有效，在微生物鉴定技术上是一项很大的进步，由于其数据库范围广，包含全面，为广大的微生物工作者提供了方向性指导。同时要获得准确的鉴定结果，实验过程中的每一步都需要熟练掌握，严格按照操作规程进行，尤其重要的是菌种的分离纯化、细菌数量和活性、样品预处理、严格无菌环境、与标准菌液一致的浓度范围和均匀性、培养温度和时间都是鉴定成功的保证。