1. 研究目的与意义

花色是决定观赏植物商业价值的重要性状。

花青素是一类黄酮类化合物，是植物的主要色素之一，本研究将利用浙江红山茶的大量EST序列，克隆花青素合成中的关键基因肉桂酸羟化酶（C4H）基因，并进行初步分析，为研究浙江红山茶中花青素的合成途径建立基础。

2. 国内外研究现状分析

由于花的商业价值，对花色素的研究已进行了近4个世纪。直到最近几年，对花的色素合成过程才了解得比较清楚。花色主要由下列因素决定：第一，色素的组成，包括种类和含量；第二，液泡内的环境，如液泡的pH值、共色素和金属离子含量的变化；此外，一些外界因素，如光、温度等，对花色形成也起着不可或缺的作用。植物花中主要含有三大类色素，即类黄酮、类胡萝卜素及生物碱类色素，其中类黄酮是主要色素。

类黄酮化合物因其结构差异可被分为6 种主要类型，包括黄酮( flavone)、黄酮醇( flavonol)、异黄酮( isoflavone)、黄烷酮( flavanone)、黄烷醇( flavanol)、花色素( anthocyanidin)。催化类黄酮合成的主要酶有：苯丙氨酸解氨酶(PAL)、肉桂酸羟化酶(C4H)、4-香豆酰CoA 连接酶(4CL)、查耳酮合成酶(CHS)、查耳酮异构酶(CHI)、黄烷酮3-羟化酶(F3H)、类黄酮3^，-羟化酶(F3^，H)、类黄酮3^，,5^，-羟化酶(F3^，5^，H)、黄酮醇合成酶(FLS)、黄酮合成酶(FSI 和FSII)、二氢黄酮醇4-还原酶(DFR)、无色花色素还原酶(LAR)、无色花青素双加氧酶(LDOX)、花青素合成酶(ANS)、类黄酮糖基转移酶(UFGT)、异黄酮还原酶(IFR)、异黄酮合成酶(IFS)、花青素-鼠李糖苷转移酶(3RT)、花青素还原酶(ANR)等.

1994年Matsumoto等以水稻(Oryza sativa)的PAL的cDNA为探针，获得了茶树PAL基因，该基因全长2330bp，编码714个氨基酸残基^[11]。1992 年，矮牵牛(Petunia hybrida Vilm)中的F3H基因被克隆，并于大肠杆菌(E.coli)中功能性高水平表达。

3. 研究的基本内容与计划

内容：本研究利用race技术克隆浙江红山茶c4h基因，并通过生物信息学对其进行分析。

计划：

1、设计引物 根据油茶转录组测序得到的序列设计引物，要注意引物二聚体及发夹结构的形成情况。并选择合适的退火温度及活化能。

4. 研究创新点

实验利用RACE技术首次克隆并得到浙江红山茶C4H的基因。