1. 研究目的与意义

杂交鹅掌楸是高大的落叶乔木，其生长周期长的特点极大的阻碍了对其基因功能的研究。因此建立一个高效的鹅掌楸原生质体瞬间表达体系将为鹅掌楸的基因功能研究提供一个快速方便的操作平台。

2. 国内外研究现状分析

植物原生质体的遗传转化研究是从20世纪80年代以后逐渐开展起来的，现在已经有多种方法，其中最为常见的方法是PEG介导转化法，作为一种在植物原生质体遗传转化中应用最普遍的方法，在很多植物中都基于PEG法建立了原生质体的瞬时表达体系。谭碧月等制备了杨树叶肉原生质体，以PEG法介导质粒DNA转化，获得了转化率在80%以上的瞬间表达体系，可用于亚细胞定位和信号转导研究。YukichiFujikawa等以拟南芥为材料，分离出了叶肉原生质体，用PEG介导的转化法将外源载体转入原生质体细胞，利用荧光补偿实验来研究原生质体细胞中的蛋白间的相互作用。近年来，随着原生质体转化技术的日渐成熟，很多植物材料的原生质体被分离出来应用于转化研究，但转化效率问题一直是原生质体转化的核心问题，影响PEG法转化原生质体的因素的影响主要有：外源基因的浓度和构象、外源DNA序列的重复性、PEG溶液浓度和pH值以及加入DNA和PEG的顺序等。

3. 研究的基本内容与计划

利用实验室杂交鹅掌楸体胚性悬浮系细胞制备原生质体，建立其瞬间表达转化体系。计划如下：

2014.2.15―2014.3.1查阅文献，做预备实验

2014.3.2－2014.4.10进行具体试验

4. 研究创新点

采用杂交胚性悬浮系细胞制备原生质体并建立其瞬间表达体系，将为杂交鹅掌楸基因功能的研究提供一个快速方便的操作平台。