全文总字数：1756字

1. 研究目的与意义

研究目标：研究凝结芽孢杆菌内的亮氨酸脱氢酶基因，构建并获得重组菌株，并对重组菌株所产亮氨酸脱氢酶进行初步的酶学性质研究。

2. 国内外研究现状分析

近几年来，国内外对于亮氨酸脱氢酶在球形芽孢杆菌和蜡状芽孢杆菌中的性质及基因的克隆研究取得一定的进展。

然而对于凝结芽孢杆菌亮氨酸脱氢酶的各方面研究进展缓慢，报道甚少。

所以，利用基因工程的技术，以凝结芽孢杆菌为出发菌株，克隆表达菌株里的亮氨酸脱氢酶基因，构建获得重组菌株并表达产生亮氨酸脱氢酶，并对重组菌株所产亮氨酸脱氢酶进行初步的酶学性质研究上存在很大的发展空间。

3. 研究的基本内容与计划

以大肠杆菌为目标菌株，通过文献及资料确定其亮氨酸脱氢酶的基因序列，再通过pcr的方法获得目的基因片段，构建并获得重组质粒，再通过必要的实验方法构建并获得能够表达重组亮氨酸脱氢酶的重组大肠杆菌。

2010.3-2010.4 文献检索，资料准备，开题报告及探索性实验；

2010.4-2010.5 分步实验；

4. 研究创新点

针对亮氨酸脱氢酶在自然菌株中都是胞内酶，考虑到在实验运用和工业生产中的技术要求和成本问题，本实验创新性地构建一种能够内表达生产亮氨酸脱氢酶的重组菌株，使得在获得亮氨酸脱氢酶的技术要求和成本大大降低，同时使获得的酶纯度更高，并通过优化诱导和高拷贝重组菌的构建，使得重组的菌株能够高产亮氨酸脱氢酶，为以后的实验和工业运用提供新的方法和道路。