舍曲林逆转拮抗CSDS抑郁模型对海马SIK2表达的促进效应开题报告

1. 研究目的与意义

（阐述课题研究的现状及发展趋势，本课题研究的意义和价值、参考文献）： 抑郁症在21世纪已是愈来愈严重，越来越令人头疼的一种神经精神疾病。抑郁症不仅给患者本人带来巨大的身心痛苦和经济成本，还严重威胁着家庭生活质量甚至社会安定。尽管临床上迄今已有较多门类的抗抑郁药物，但由于中枢大脑的结构与功能复杂性，对于抑郁症的神经生物学机理学术界一直未达成共识，近年来有越来越多的病理靶点被发现。 盐诱导激酶（salt-inducible kinase, SIK）是一种丝氨酸/苏氨酸激酶，属于腺苷酸活化激酶（AMP-activated protein kinase，AMPK）家族，也是神经元核内环磷酸腺苷反应元件结合蛋白（CREB） 的目的基因之一，含三种成员：SIK1、SIK2 和 SIK3。研究表明，SIK 激酶能调节 CRTC-CREB 复合体的结合形成，如 SIK2作为 CREB转录共激活因子（CRTC1）的磷酸化激酶，可促使 CRTC1 的 Ser151位点磷酸化，磷酸化 CRTC1 无法入胞核而只能留在胞浆中，导致 CRTC-CREB复合体不能形成，从而间接抑制 CREB 活性；而CREB控制着许多促生存蛋白的生物合成，间接调控多种细胞反应，包括中间代谢、神经元信号、细胞增殖和细胞凋亡。 盐酸舍曲林（SERT）属于选择性5-羟色胺再摄取抑制剂（SSRIs），是一类在临床上广泛使用的抗抑郁药。SSRIs能有效抑制单胺能神经递质5-HT在神经突触间隙内的再摄取。 临床研究表明，除改变5-HT外，SERT还能减少抑郁症患者的血清炎症因子（IL-6，IL-10），还可改变神经元内NF-κB信号途径，意味着该药其实有多个药理靶点。舍曲林是选择性5-HT再摄取抑制剂（SSRI）“五朵金花”之一，除5-HT系统外，海马SIK2有没有可能也是舍曲林的药理靶点呢？本课题对此做初步探讨。

本课题旨在通过Western Blot，qRT-PCR，免疫荧光，CSDS模型以及配套行为学测试方法，研究SSRI药舍曲林逆转拮抗慢性社会挫败应激CSDS模型对海马SIK2表达的促进效应，以期能够找到又一个抑郁症靶标，具有显著临床价值与意义。同时拓展了对抑郁症神经生物学的研究认识。

参考文献:1. Heym J, Koe BK. Pharmacology of sertraline: a review. J Clin Psychiatry. 1988 Aug;49 Suppl:40-5.2. Krishnan V, Nestler EJ. The molecular neurobiology of depression. Nature. 2008 Oct 16; 455(7215):894-902.3. Cipriani A, La Ferla T, Furukawa TA, Signoretti A, Nakagawa A, Churchill R, McGuire H, Barbui C. Sertraline versus other antidepressive agents for depression. Cochrane Database Syst Rev. 2010 Apr 14;(4):CD006117.4. Dean J, Keshavan M. The neurobiology of depression: An integrated view. Asian J Psychiatr. 2017 Jun;27:101-111.5. Jiang B, Wang H, Wang JL, Wang YJ, Zhu Q, Wang CN, Song L, Gao TT, Wang Y, Meng GL, Wu F, Ling Y, Zhang W, Li JX. Hippocampal Salt-Inducible Kinase 2 Plays a Role in Depression via the CREB-Regulated Transcription Coactivator 1-cAMP Response Element Binding-Brain-Derived Neurotrophic Factor Pathway. Biol Psychiatry. 2019 Apr 15;85(8):650-666.6. Liu Y, Tang W, Ji C, Gu J, Chen Y, Huang J, Zhao X, Sun Y, Wang C, Guan W, Liu J, Jiang B. The Selective SIK2 Inhibitor ARN-3236 Produces Strong Antidepressant-Like Efficacy in Mice via the Hippocampal CRTC1-CREB-BDNF Pathway. Front Pharmacol. 2021 Jan 14;11:624429.7、 Wang CN, Gong SN, Guan W, Wang JL, Gao TT, Wang Y, Sun F, Jiang B. Hippocampal overexpression of chordin protects against the chronic social defeat stress-induced depressive-like effects in mice. Brain Res Bull. 2020, 158:31-39.8、 Chen C, Shen JH, Xu H, Chen P, Chen F, Guan YX, Jiang B, Wu ZH. Hippocampal PPARα is involved in the antidepressant-like effects of venlafaxine in mice. Brain Res Bull. 2019, 153:171-180.9、Zhang JJ, Gao TT, Wang Y, Wang JL, Guan W, Wang YJ, Wang CN, Liu JF, Jiang B. Andrographolide Exerts Significant Antidepressant-Like Effects Involving the Hippocampal BDNF System in Mice. Int J Neuropsychopharmacol. 2019, 22(9): 585-600.10、Song L, Wang H, Wang YJ, Wang JL, Zhu Q, Wu F, Zhang W, Jiang B. Hippocampal PPARα is a novel therapeutic target for depression and mediates the antidepressant actions of fluoxetine in mice. Br J Pharmacol. 2018, 175(14):2968- 2987.11、Ni YF, Wang H, Gu QY, Wang FY, Wang YJ, Wang JL, Jiang B. Gemfibrozil has antidepressant effects in mice: Involvement of the hippocampal brain-derived neurotrophic factor system. J Psychopharmacol. 2018, 32(4):469-481.12、 Xu D, Sun Y, Wang C, Wang H, Wang Y, Zhao W, Bao G, Wang F, Cui Z, Jiang B. Hippocampal mTOR signaling is required for the antidepressant effects of paroxetine. Neuropharmacology. 2018, 128:181-195.13、Ying Lua,1, Xiang Xua,1, Tong Jianga, Lan Jina, Xu-Dong Zhaoa, Jia-Hui Chenga, Xue-Jun Jina,Juan Maa, Hu-Nan Piaob,, Lian-Xun Piaoa,Sertraline ameliorates inflammation in CUMS mice and inhibits TNF-α-induced inflammation in microglia cellsInternational Immunopharmacology 67 (2019) 119–128

2. 研究内容和问题

抑郁症已是一种广为人知的神经精神疾病，其危害程度不言而喻。

抑郁症的病理生理机制复杂，涉及多个系统通路，而我们课题组的最新研究发现海马盐诱导激酶2（sik2）介导参与了慢性应激诱发抑郁症过程，是一有效抗抑郁靶点。

以c57bl/6小鼠为研究对象，制造慢性社会挫败（csds）抑郁模型，行为学测试验证模型效果；之后分批取海马组织，提取蛋白，进行western blot，检测各组的海马sik2蛋白水平；提取mrna，进行qrt-pcr，检测各组的海马sik2的mrna水平；进行海马sik2的免疫荧光实验。

3. 设计方案和技术路线

（1）对一批正常c57bl/6小鼠先给予为期10天的csds模型制造，随后的14天内每日给予腹腔注射30 mg/kg 舍曲林（组别：正常对照组，舍曲林组，csds组，csds 舍曲林组；每组10只），给药结束后进行行为学测试评价模型与舍曲林药效。之后分批取海马组织，提取蛋白，进行western blot，检测各组的海马sik2蛋白水平。

（2）对一批正常c57bl/6小鼠先给予为期10天的csds模型制造，随后的14天内每日给予腹腔注射30 mg/kg 舍曲林（组别：正常对照组，舍曲林组，csds组，csds 舍曲林组；每组10只），给药结束后进行行为学测试评价模型与舍曲林药效。之后分批取海马组织，提取mrna，进行qrt-pcr，检测各组的海马sik2的mrna水平。。

（3）对一批正常c57bl/6小鼠先给予为期10天的csds模型制造，随后的14天内每日给予腹腔注射30 mg/kg 舍曲林（组别：正常对照组，舍曲林组，csds组，csds 舍曲林组；每组10只），给药结束后进行行为学测试评价模型与舍曲林药效。之后分批进行灌注固定，冰冻切片获得海马脑片，进行海马sik2的免疫荧光实验。

4. 研究的条件和基础

1.本论文前期调研工作开展相对充分，已获得比较完全的文献资料.

2.本课题组一直致力于对抑郁症病理生理机制以及新型抗抑郁药物的研究开发。本研究将主要在南通大学药学院学院药理学实验室进行。该实验室为江苏省炎症与分子药靶重点实验室依托基地。近5年来承担国家省部级课题40多项、市厅级课题30多项。设有心血管药理研究室、神经精神药理研究室、生化研究室、行为学研究室等。舍曲林药物与SIK2抗体等关键试剂均已购置，南通大学动物房可提供C57BL/6小鼠。