南方根结线虫毒性相关基因Cg-1的同源克隆及病毒沉默载体的构建开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

一．本课题的意义、国内外研究概况、应用前景等（列出主要参考文献）

1.课题研究意义

根结线虫（meloidogynespp.）属于垫刃目(tylenchida)，垫刃亚目(tylenchina)，异皮科(heteroderidae)，根结亚科(meloidogyninae)，根结线虫属(meloidogyne)。是世界性分布的威胁农业生产的主要病原物之一，是植物根系定居性内寄生生物,是我国经济作物的重要病原线虫,主要包括南方根结线虫(m.incognita)、花生根结线虫(m.arenaria)、爪哇根结线虫(m.javanica)和北方根结线虫(m.hapla)等4大优势种群[1]。在我国以南方根结线虫分布最广危害最大。目前主要的防治策略包括农业防治、化学防治、生物防治和选用抗耐病品种等。种植抗病品种是目前最经济有效的防治手段，但可获得的抗性种质非常匮乏，其中应用最成功的是来自野生番茄的mi基因，该基因对南方、爪哇和花生根结线虫都有较强的抗性，但该基因存在温度敏感性，当温度超过28或30度时，其介导的抗性会丧失，此外，由于单一抗性品种的连续种植，能够克服mi基因抗性的根结线虫毒性群体相继出现。因此，在这种形势下，明确线虫毒性变异机制，对于降低线虫毒性群体出现几率，提供新的抗线虫技术和手段显得尤为重要。

2. 研究的基本内容和问题

二．研究的目标、内容和拟解决的关键问题

1.研究目标

采用同源克隆法，从能克服南方根结线虫中克隆毒性相关因子cg-1，构建以trv介导的沉默载体并转化含mi的抗性番茄，明确cg-1对南方根结线虫毒性变异的影响，同时评估trv介导的基因沉默对研究线虫基因功能的效果

3. 研究的方法与方案

三．研究方法、技术路线、实验方案及可行性分析

1.研究方法、技术路线及实验方案

4. 研究创新点

四．特色或创新之处

本论文采用同源克隆法，从能克服Mi-1抗性的南方根结线虫中克隆了毒性基因cg-1，同时克隆了其无毒种群的cg-1基因。构建以烟草脆裂病毒（Tobaccorattlevirus,TRV）介导的沉默载体，将无毒和毒性种群的Cg-1基因转入含Mi-1的抗性番茄，达到RNA干扰的效果，从而降低南方根结线虫的能力，获得防治根结线虫病的有效方法。

5. 研究计划与进展

五．研究计划及预期进展

1．2012年8月基本操作技能的熟悉

2．2012年9月-11月南方根结线虫cg-1基因的同源克隆和trv沉默载体的构建，以及番茄苗株的培育。