FgSSO1在小麦赤霉病菌生长发育及致病过程中的功能分析开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

小麦赤霉病是世界性麦类病害，每年给麦类生产带来严重损失。同时被侵染的麦类含有don及zea毒素，有害人类健康。赤霉病由禾谷镰刀菌（fusariumgraminearum）引起,因此开展该病原菌毒素产生机理及致病机制的研究具有重要的意义。然而,从环境保护角度考虑,通过分子生物学研究,揭示小麦赤霉菌致病机理进而指导培育抗病品种,对于防治小麦赤霉病的发生具有重要的意义。

本研究利用同源重组原理,,构建了小麦赤霉菌fgsso1敲除突变体。应用peg介导的原生质体转化,在含有潮霉素的培养基上进行选择获得转化子。获得的转化子进行了pcr鉴定及southern杂交验证,进一步对阳性转化子进行表型观察及功能研究。

国内外研究概况：

2. 研究的基本内容和问题

本实验采用以原生质体转化为基础、潮霉素抗性基因作为筛选标记，对基因FgSSO1进行敲除，通过在含有潮霉素的培养基上筛选出转化子，在通过Southern

blot验证鉴定基因FgSSO1是否敲掉，并对其功能进行初步研究。

3. 研究的方法与方案

可行性分析：

拟开展研究方法有理论依据，试验方法循序渐进；研究对象获取方便；试验所需仪器设备技术均已具备；实验室长期从事基因敲除研究工作，在国内外核心期刊发表大量相关研究论文。另外，本实验室一直从事与相关的分子生物学研究，具有较扎实的研究基础，在国内居领先地位。实验室的其他成员在基因敲除研究方面也具一定的经验，可以给予课题研究很大的帮助。

4. 研究创新点

利用同源重组进行基因敲除在丝状真菌中已得到广泛应用，小麦赤霉菌的单倍体背景使基因敲除技术在该领域的应用比高等动植物更为便捷。在小麦赤霉菌基因库下载目的基因序列，设计引物，通过pcr将目标基因上、下游片段和筛选标记基因片段部分连接在一起，在通过peg介导的赤霉菌原生质体转化。

首先在含有抗生素的筛选培养基上筛选转化子，利用southernblot筛选验证阳性的敲除转化子，并进一步验证其功能。

特色：基于splitmarkerpcr的技术构建构建突变体的筛选更加快捷方便。对于小麦赤霉菌基因组内每个基因的基因敲除及研究各个基因的功能缩短了时间、提供了很大的方便，更增加了准确性。

5. 研究计划与进展

8月1日--8月30日构建fgsso1基因敲除功能载体

9月1日-10月30日原生质体转化 southernblot验证获得阳性突变体

11月1日-1月20日对获得突变体进行表型分析