拟南芥AtMC1基因的克隆及载体构建开题报告

 2023-02-13 09:02

1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)

本课题的意义

microrna ( mirna) 是由具有发夹结构的约70 ~ 90 个碱基大小的单链rna, 前体经dicer 酶加工后生成的一种大小约21 ~ 23 个碱基的单链小分子rna,通过碱基间互补配对直接结合于靶基因mrna上, 从而导致靶基因的特异性剪切。risc能直接切开与mirna互补的靶mrna中的磷酸二酯键, 形成小片段并被直接降解。如拟南芥中的m i r 1 6 4 通过与互补的nac1(nam/ataf/cuc1)转录因子结合并指导risc剪切nac1 mrna, 从而调控nac1 相关的生长素信号转导途径, 影响拟南芥侧根的发育。

ago2又是risc的主要组成成分,有研究表明amc1蛋白与拟南芥的抗病性有关,因此本课题旨在研究ago2与amc1是否有相互作用,进而探究microrna新的调控机制。

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2. 研究的基本内容和问题

研究的目标

本实验通过对拟南芥中ago2和amc1一系列的实验研究,来探究ago2和amc1蛋白之间有没有相互作用

研究的内容

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3. 研究的方法与方案

可行性分析

拟开展研究方法有理论依据,试验方法循序渐进;研究对象获取方便;试验所需仪器设备技术均已具备;导师长期从事Small RNA的研究工作,在国内外核心期刊发表大量相关研究论文,有丰富的研究经验。另外,本实验室一直从事与相关的分子生物学研究,具有较扎实的研究基础,同时与国外实验室建立密切的合作关系,建立的分子植物与微生物互作实验室,在国内居领先地位。实验室的其他成员在分子生物学研究方面也具一定的经验,可以给予课题研究很大的帮助。

4. 研究创新点

特色或创新之处

新的mirna 及靶基因的发现有助于发现植物抗病信号传导途径中的新元件,从而有助于更深入地理解植物免疫机制。越来越多的植物病原菌基因沉默抑制子的发现,有助于提高对植物病原菌与寄主互作和共进化的理解,进而为植物抗病性育种提供研究线索和理论基础。

现已有研究表明amc1与植物抗病性有关,如果能证明amc1与ago2又相互作用,可能会发现新的植物,抗病调节体制,进而为植物抗病性育种提供研究线索和理论基础。

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5. 研究计划与进展

研究计划及预期进展

(1)克隆出拟南芥amc1与ago2基因。

(2)将ago2与amc1目的基因片段连接到p-easy blunt 载体。

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