piggyBac转座子在二化螟胚胎中的剪切和转座活性检测开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

转座子或转座元件（transposable element），是一种不依靠同源重组而能在基因组内移动(转座)的遗传学元件(dna序列)。

按照转座机制及序列特征可分为两大类：以rna为中介，反转录成dna后进行转座的i型转座子即反转录转座子(retrotransposon或retroposon)和不以rna为中介，直接通过转座酶发生转座的ii型转座子(transposon)。

转座子几乎存在于所有真核生物基因组中，是真核生物基因组的重要组成部分。

2. 研究的基本内容和问题

研究目标： 明确pb转座子在二化螟胚胎中的剪切和转座活性。

研究内容：1. 检验piggybac转座子ifp2在二化螟胚胎中的剪切活性。

2. 检验piggybac转座子ifp2在二化螟胚胎中的转座活性。

3. 研究的方法与方案

研究方法：1. 昆虫胚胎的收集:将适龄的雌雄蛾放入产卵箱，定时收集昆虫胚胎。

2. 昆虫胚胎显微注射:将收集到的卵用50%（v/v）漂水脱壳1分钟，冲净漂水；在显微镜下将脱了壳的卵，按头尾方向排列整齐后，粘到带有双面胶的盖玻片上；在硅胶中干燥10分钟，以减少内压；干燥完以后，用一薄层的halocarbon oil 700盖好胚胎；将载玻片置于倒置显微镜下，用固定到操作仪上的针头进行胚胎的显微注射。

3. 剪切活性的检测：将已构建好helper辅助质粒和donor供体质粒共同注射入二化螟胚胎中，24h后重新抽提质粒dna。

4. 研究创新点

明确二化螟胚胎中IFP2转座子的活性，为实现在该害虫中的基因转化奠定基础。

5. 研究计划与进展

2014.9-2014.12 构建质粒载体、饲养二化螟并采集卵块，对其胚胎进行PB转座子的剪切和转座活性实验2015.1 -2015.3 总结实验结果，撰写结题报告。