大肠杆菌鞭毛蛋白对FMDV VP1免疫增强效力的评估开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

1.课题的意义、国内外研究进展、应用前景

口蹄疫一直影响着口蹄疫疫区的畜牧业发展，由于口蹄疫的流行造成了全世界畜牧业不同程度的经济损失。目前，在不少国家和地区仍然使用着弱毒疫苗或灭活疫苗来防控口蹄疫，因此亟需研制出效果更加理想的新型疫苗。目前国内外广泛研究口蹄疫病毒载体疫苗获得了突破性进展；亚单位疫苗因只含有病毒衣壳蛋白，不含有核酸，则具有很高的安全性；基因缺失苗既保持了传统疫苗的高效性同时又消除了常规疫苗多次免疫干扰鉴别诊断的缺陷；兰州兽医研究所等单位共同研制的抗猪o型fmdv基因工程疫苗已获得一类新兽药证书；由上海申联研发的猪o型口蹄疫合成肽疫苗已进入生产应用阶段，该疫苗连续免疫猪两次，抗体阳性率高达100%；dna疫苗、反向遗传疫苗、可饲疫苗的实验结果标明能够很好地对牛羊等草食动物的疫病进行防范。

近年来，鞭毛蛋白作为佐剂得到了广泛研究，无论是与抗原混合还是融合表达，经注射免疫还是滴鼻免疫，均显示出良好的佐剂作用，能够增强病毒疫苗株的免疫作用。当抗原与鞭毛蛋白融合表达时，抗原可嵌合到鞭毛蛋白的 n-末端，或者c-末端，也可插入鞭毛蛋白的高变区，均不会破坏鞭毛蛋白的生物活性。鞭毛蛋白是一种有效的免疫激活剂，能刺激不同的生物效应，介导先天免疫反应以及适应性免疫反应。因此，鞭毛蛋白可用于构建感染性疾病的疫苗，也适用于癌症免疫治疗。研究结果已经表明鞭毛蛋白是有效的全身性免疫和粘膜免疫佐剂，鞭毛蛋白与抗原共用能诱导适应性免疫应答。抗原与鞭毛蛋白融合，鞭毛蛋白高变区基因修饰和疫苗的免疫都可显着影响鞭毛蛋白佐剂的免疫效率。当免疫疫苗时，还有考虑机体预先存在的抗鞭毛蛋白的抗体作用，因为抗鞭毛蛋白抗体可以中和鞭毛蛋白的佐剂性质。而且，这些抗体可以减弱先天免疫应答。进一步研究表达宿主和信号通路可提供鞭毛蛋白的保护效力。此外，使用适当的疫苗递送载体可以提高含鞭毛蛋白疫苗的效力。

2. 研究的基本内容和问题

.研究的目标、内容

以pcold-i为载体构建的重组表达质粒，通过体外诱导表达及western blot证实是否具有免疫原性。随后将纯化后的蛋白通过小鼠免疫试验筛选的有效佐剂及免疫原，为接下来进行猪体的免疫保护试验提供依据。

1. 拟解决的关键问题

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   3. 研究的方法与方案

   研究方法、技术路线、实验方案及可行性分析

   1.拟采取的研究方法或实验方法，步骤，技术路线及可行性论证

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   4. 研究创新点

   本研究以非致病性大肠杆菌鞭毛蛋白（non-pathogenic Escherichia coli, NPEC）为佐剂，与口蹄疫抗原混合和融合两种形式构建多个疫苗株来评估疫苗的免疫效果。进行小鼠免疫实验，通过检测特异性IgG抗体和sIgA抗体滴度，评价疫苗免疫原性，进而筛选有效疫苗，为FMD新型疫苗的筛选和研制提供新的思路。

   5. 研究计划与进展

   研究计划及预期进展

   2018.9-2018.10 重组质粒的构建、体外诱导和表达

   2018.10-2018.11 蛋白纯化、内毒素和纯化蛋白浓度的检测

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